[생명공학 실험] CIPP에서의 이온크로마토그래피

'생명공학 실험 끄적이기'의 친화성 크로마토그래피 시간에서 CIPP에 대해 언급한 적이 있는데요.

오늘은 지난번에 이어 CIPP에서 이온 크로마토그래피가 어떻게 사용되는지에 대해 끄적여보도록 하겠습니다.

 

[생명공학 실험] 친화성 크로마토그래피의 원리 및 이해

 

*끄적이는 생명시간은 PC버전을 기준으로 작성되었습니다*

 

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정제 공정 개발, CIPP에서의 이온크로마토그래피

CIPP에서는 4가지의 고려 사항이 있습니다.

바로, 결합용량(capacity), 속도(speed), 회수율(recovery), 분리능(resolution)입니다.

각 정제 단계마다 1개 이상의 사항을 포함할 수 있어야 합니다.

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크로마토그래피 종류별 특징과 적합한 CIPP 단계는 다음과 같습니다.

출처: cytiva

(AC: Affinity chromatography, IMAC: Immobilized metal affinity chromatography, SEC: Size-exclusion chromatography, IEX: Ion-exchange chromatography, HIC: Hydrophobic interaction chromatography, RPC: Reverse phase chromatography)

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이온 크로마토그래피는 결합 용량(capacity)과 분리능(resolution)이 우수하여 CIPP의 모든 단계에서 사용이 가능합니다.

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Capture step은 회수율이 중요한 고려 요소로, 결합 용량과 실험 속도가 중요합니다. 이러한 측면에서 IEX는 capture step에서의 고려 요소를 모두 포괄하여 1차 정제로 사용하기에 적합합니다.

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Polishing step의 경우, 회수율을 높여 많은 단백질을 얻은 1차 정제물에서 불순물과의 분리능을 높여 타깃 단백질의 순도를 향상하는 것을 주목적으로 합니다.

IEX는 이온화 특성의 특이적인 결합으로 물질을 분리해내기 때문에 타깃 단백질의 구조적 차이에 의한 variants, 핵산 또는 endotoxin을 제거하는 데 효율적인 크로마토그래피입니다.

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